通行时间：每日5时至次日1时。
1、隧道内准许9座（不含）以下、高度不超过3米客车通行；
2、其它机动车、非机动车、行人禁止通行。
3、隧道内最高行驶时速不得超过每小时60公里。
禁行时间：每日1时至5时。
工作日（节假日除外）07:00～20:00禁止当日对应车牌尾号前后两位车牌尾号数字的小型载客汽车通行。
工作日（节假日除外）7:00～8:30、17:00～19:00，禁止外埠小型载客汽车通行；长江隧道全日禁止7座（含）以上载客汽车通行，出租车过长江隧道不受限行管制。
武汉长江隧道限行规则
长江隧道通行时间内禁止行人和下列车辆通行:
9座以上(不含9座)载客车辆;
自行车、电动自行车、畜力车、残疾人机动轮椅车、板车、手推车等非机动车;
非通行时间内,除长江隧道运营单位养护维修和保洁车辆外,未经公安机关交通管理部门批准,任何车辆不得通行。
武汉长江隧道限行规则：
工作日(节假日除外)07:00～20:00禁止当日对应车牌尾号前后两位车牌尾号数字的小型载客汽车通行;工作日(节假日除外)7:00～8:30、17:00～19:00，禁止外埠小型载客汽车通行;长江隧道全日禁止7座(含)以上载客汽车通行，出租车过长江隧道不受限行管制。ETC收费，5座以下客车通行费8元/次;年票2100元/年，不限次数。
小型新能源客车不受区域限行规定的限制（即不受长江大桥、江汉一桥通行措施的限制）。例如长江大桥和江汉一桥的单双号限行；东湖风景区等景区节假日、其他地区重大活动等临时设定的单双号限行等尾号限行规定，新能源小型客车不受限，允许通行。大型新能源客车不受长江大桥、江汉一桥通行措施的限制。但是其它关于大客车的通行管理规定还是需要遵守的，例如长江隧道、东湖隧道、水果湖隧道及市内部分高架对大型客车是禁止通行的，新能源大型客车应到遵守此类规定。